Набор позволяет количественно измерить одновременно два параметра клеточного здоровья: апоптоз (по активности каспаз-3/7) и клеточную гибель (по проникновению в клетки 7-AAD). Протокол без этапов отмывки клеток от реагентов позволяет быстро получить статистически надежные результаты по процентному соотношению и концентрации клеток: жизнеспособных, в раннем апоптозе, на стадии позднего апоптоза и мертвых.

Наборы Muse характеризуются максимально упрощенной пробоподготовкой, они оптимизированы для использования на клеточном анализаторе Muse, но совместимы также с другими проточными цитометрами (при наличии соответствующего лазера и светофильтров*).

* Пожалуйста, уточняйте возможность использования набора на вашем проточном цитометре у специалиста Диаэм Александра Шумеева

Набор позволяет количественно измерить одновременно два параметра клеточного здоровья: апоптоз (по связыванию аннексина V с фосфатидилсерином) и клеточную гибель (по проникновению в клетки 7-AAD). Протокол без этапов отмывки клеток от реагентов позволяет быстро получить статистически надежные результаты по процентному соотношению и концентрации клеток: жизнеспособных, в раннем апоптозе, на стадии позднего апоптоза и мертвых.

Наборы Muse характеризуются максимально упрощенной пробоподготовкой, они оптимизированы для использования на клеточном анализаторе Muse, но совместимы также с другими проточными цитометрами (при наличии соответствующего лазера и светофильтров*).

* Пожалуйста, уточняйте возможность использования набора на вашем проточном цитометре у специалиста Диаэм Александра Шумеева

Набор позволяет количественно измерить одновременно два параметра клеточного здоровья: апоптоз (по суммарной активности каспаз-1, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9) и клеточную гибель (по проникновению в клетки 7-AAD). Протокол без этапов отмывки клеток от реагентов позволяет быстро получить статистически надежные результаты по процентному соотношению и концентрации клеток: живых, с мультикаспазной активностью и мертвых.

Наборы Muse характеризуются максимально упрощенной пробоподготовкой, они оптимизированы для использования на клеточном анализаторе Muse, но совместимы также с другими проточными цитометрами (при наличии соответствующего лазера и светофильтров*).

* Пожалуйста, уточняйте возможность использования набора на вашем проточном цитометре у специалиста Диаэм Александра Шумеева

Все компоненты этого набора хранятся при температуре 2-8 °C до 12 месяцев. Окрашивающий раствор Annexin V-PE и 7-AAD следует хранить в темноте и не замораживать.

Набор для детекции апоптоза TUNEL BrightGreen представляет собой обновленную версию набора TUNEL FITC (A111). В состав набора BrightGreen входит FITC-12-dUTP и запатентованный Bright Factor, запатентованный фактор Bright, который нековалентно соединяется с FITC для повышения его стабильности и усиления его сигнала. BrightGreen может сохранять высокую интенсивность флуоресценции при непрерывном облучении сильным лазером в течение 6 минут.

Компоненты наборы:

• 5 × Equilibration Buffer
• BrightGreen Labeling Mix
• Recombinant TdT Enzyme
• Proteinase K (2 mg/ml)
• DNase I (1 U/μl)
• 10 × DNase I Buffer

Хранить при -20 °C. Смесь BrightGreen следует защищать от света и хранить при температуре -20 °C.

Аннексин V обладает высоким сродством к фосфатидилсерину и признан одним из чувствительных индикаторов для выявления раннего клеточного апоптоза.

Набор также содержит популярный флуоресцентный краситель пропидий йодид (PI), который не проникает в живые клетки, и обычно используется для обнаружения мертвых клеток в популяции.

Подходит для проточной цитометрии и флуоресцентного микроскопа.

Хранить при 4-8 °C до 12 месяцев, аннексин V-FITC хранить при -20 °C без длительного использования.

В этом наборе используется метод TUNEL основанный на включении модифицированных аналогов тимидина терминальным ферментом дезоксинуклеотидилтрансферазой (TdT) в 3'-гидроксильный (3'-OH) конец фрагментированной ДНК. Смесь для маркировки BrightRed в наборе содержит TMR red-dUTP и запатентованный фактор Bright, который нековалентно соединяется с TMR red для повышения его стабильности и усиления сигнала, тем самым делая маркер ярче.

Компоненты наборы:

• 5 × Equilibration Buffer
• BrightRed Labeling Mix
• Recombinant TdT Enzyme
• Proteinase K (2 mg/ml)
• DNase I (1 U/μl)
• 10 × DNase I Buffer

Хранить при -20 °C. Смесь BrightRed следует защищать от света и хранить при температуре -20 °C.

Метод TUNEL основан на включении модифицированных аналогов тимидина терминальным ферментом дезоксинуклеотидилтрансферазой (TdT) в 3/-ОН конец фрагментированной ДНК. ДНК, меченную FITC-12-dUTP, можно непосредственно наблюдать с помощью флуоресцентной микроскопии или количественно определять с помощью проточной цитометрии.

Компоненты набора:

• 5 × Equilibration Buffer
• FITC-12-dUTP Labeling Mix
• Recombinant TdT Enzyme
• Proteinase K (2 mg/ml)
• DNase I (1 U/μl)
• 10 × DNase I Buffer

Хранить при -20 °C.

Аналит	Вид
Akt/PKB (Ser473)	человек, мышь, крыса
JNK/SAPK1 (Thr183/Tyr185)	человек, мышь, крыса
BAD (Ser112)	человек
Bcl-2 (Ser70)	человек
p53 (Ser46)	человек
активная Caspase-8 (total)	человек
активная Caspase-9 (total)	человек

Подробнее о мультиплексном анализе.

Muse — компактный клеточный анализатор, работающий по принципу проточной цитометрии для простого и недорого и быстрого анализа. Управление через сенсорный дисплей, интуитивное программное обеспечение, оптимизированные наборы реагентов формата «смешать и измерить» вместе обеспечивают существенное упрощение решения исследовательских задач.

Клеточный анализатор Muse обеспечивает прямое измерение концентрации клеток (без использования референсных частиц) и количественную детекцию флуоресцентных параметров. Оптимизированные наборы реагентов и адаптированные к ним модули программного обеспечения позволяют определять жизнеспособность клеток, апоптоз на разных этапах, исследовать пролиферацию и клеточный цикл, клеточный сигналинг, параметры иммунного статуса и др.

Analisys	Cell concentration		Viability
	Average % CV	% CV Range	Average % CV	% CV Range
Image-based Automated Counter	9,2%	1,2-23,3%	3,7%	0,8-12,1%
Manual Hemocytometer	9,2%	6,3%	4,5%	0,5-9,2%
Muse	4%	0,3-8,8%	2,2%	0,4-5,6%

Преимущества системы:

• компактность: можно поставить в любом месте;
• легкость и простота использования: готовые наборы реагентов c упрощенной пробоподготовкой;
• интуитивное управление: позволяет сделать работу максимально комфортной;
• программные модули адаптированы под наборы реагентов: простой анализ образцов;
• универсальность: два открытых программных модуля под реагенты пользователя;
• возможность обслуживания без участия сервисного инженера.

Другие методы анализа	Muse
Счетные камеры (например, камера Горяева) Ограничения в связи с низким разрешением поглощения красителя для определения жизнеспособности. Погрешности, связанные с ручным подсчетом.	Анализ Muse Count and Viability Точный, основанный на флуоресцентном окрашивании метод определения живых и мертвых клеток. Микрокапиллярная флюидика для прямого подсчета концентрации с высокой точностью.
Автоматические гемоцитометры и клеточные анализаторы на основе светлопольной микроскопии Низкая точность в результате анализа небольшого числа клеток, использование ограничено подсчетом концентрации и жизнеспособности.	Методы анализа Muse Флуоресцентный сигнал на основе специфичного связывания реагентов с мишенями. Статистическая достоверность достигается измерением тысяч клеток за несколько минут.
Вестерн-блот и другие методы обобщенного анализа клеточной популяции Гетерогенность популяции теряется при пулировании. Методы времязатратные и требуют внешнего контроля. Реагенты должны быть оптимизированы и валидированы. Результаты качественные или, в лучшем случае, полуколичественные.	Методы анализа Muse Результаты для популяции в каждом образце на основе анализа каждой клетки. Очень простые методы пробоподготовки, дополнительно нужны только пипетки. Реагенты оптимизированы и валидированы для использования на разных типах клеток.
Большие проточные цитометры Реагенты должны быть валидированы. Оптимизация требует затрат времени и ценного образца. Нужна отдельная настройка установок прибора под каждую задачу.	Методы анализа Muse Флуоресцентные реагенты уже подобраны под лазер и детекторы Muse, оптимизированы для разных типов клеток. Валидированные методы анализа, оптимизированная пробоподготовка и предустановленные настройки прибора в программном обеспечении.

Технические характеристики

• Твердотельный зелёный диодный лазер — 532 нм, 20 мВт;
• параметры: прямое светорассеяние, два параметра флуоресценции;
• фильтры для детекции флуоресценции: 576/±28 (желтый), 680/±30нм (красный);
• CV, % — менее 10, стандартно менее 5;
• типы клеток: гомогенные или гетерогенные, адгезивные или суспензионные, первичные или клеточные линии;
• диапазон концентрации клеток, тыс. кл./мл — 10-500;
• размер клеток в диаметре, мкм — 2-60+;
• объём образца, мкл — 50-200+;
• формат загрузки образцов — пробирка (тип «эппендорф», 1,5 мл);
• 3 скорости пробоотбора — 7,2, 14,4 и 36 мкл/мин;
• кварцевая капиллярная ячейка 1,5 мм x 0,8 мм, внутренний диаметр канала — 100 мкм;
• прецизионная шприцевая помпа с шаговым двигателем для подачи образца;
• анализ: на самом анализаторе или внешнем компьютере (экспорт через USB pdf-отчетов, csv-файлов со статистикой, исходных данных в виде файлов fsc);
• габариты, Ш × Г × В, мм — 207 × 283 × 221;
• вес, кг — 5,9.

См. также: Заказ антител Abcam

Блистательный является широко используемым ингибитором АТФазы немышечного миозина II типа. Блеббистатин действует на сигнальный путь ROCK-myosin II, который может предотвращать апоптоз плюрипотентных стволовых клеток при диссоциации, тем самым улучшая выживаемость, пролиферацию и поддерживать плюрипотентность ПСК.

3 мг (1 мл), -20 °C.

Akt, также известная как протеинкиназа B (PKB), представляет собой серин/треонин-специфическую протеинкиназу, которая играет ключевую роль в клеточных процессах, таких как метаболизм глюкозы, апоптоз, пролиферация клеток, транскрипция и миграция клеток. AKT может фосфорилироваться комплексом mTOR 2 (mTORC2) и ДНК-зависимой протеинкиназой (DNA-PK) по остатку Serine 473 (Ser473).

Характеристики антител anti-Akt phospho (Ser473) antibody

• Видовая специфичность – человек, мышь, крыса;
• изотип – IgG;
• иммуноген – пептидная последовательность вокруг сайта фосфорилирования серина 473 (Q-F-S(p)-Y-S), полученная из человеческого Akt;
• конъюгация – неконъюгированные;
• концентрация, мг/мл – 1;
• очистка – аффинная хроматография;
• применение – ICC/IF, IHC-P, WB;
• синонимы – Protein kinase B alpha; Proto-oncogene c-Akt; RAC; PKB alpha; RAC-ALPHA; CWS6; PRKBA; AKT; PKB; RAC-PK-alpha; PKB-ALPHA; RAC-alpha serine/threonine-protein kinase; EC 2.7.11.1; Protein kinase B;
• буфер для хранения – PBS (без Mg²⁺ и Ca²⁺, pH 7,4), 150 мМ NaCl, 0,02 % азида натрия и 50 % глицерина;
• условия транспортировки, °C – +2-8;
• условия хранения, °C – - 20 (в виде аликвот).

Публикации

Данные антитела использованы в следующих публикациях:

1. Dopamine D2 receptor regulates cortical synaptic pruning in rodents

WB / Rat

Ya-Qiang Zhang et al.
Nat Commun., (2021)

2. 1,3-dichloro-2-propanol induced lipid accumulation by blocking autophagy flux in HepG2 cells.

WB / Human

Jing Lu et al.
Toxicology., (2021)

3. Mild hypothermia protects rat cortical neurons against oxygen-glucose deprivation/reoxygenation injury via the PI3K/Akt pathway.

WB, ICC/IF / Rat

Zan Gao et al.
Neuroreport., (2021)

4. Pharmacological blockage of ICAM-1 improves angiotensin II-induced cardiac remodeling by inhibiting adhesion of LFA-1+ monocytes.

WB / Mouse

Lin Qiu-Yue et al.
Am J Physiol Heart Circ Physiol., (2019)

5. Protective effects of dioscin against fructose-induced renal damage via adjusting Sirt3-mediatedoxidative stress, fibrosis, lipid metabolism and inflammation.

WB / Rat

Qiao Yujie et al.
Toxicol Lett., (2017)

Культивирование клеток в условиях, позволяющих обеспечить точный контроль кислорода, углекислого газа востребовано для широкого спектра задач:

• работа с чувствительными к газовому составу клетками;
• воспроизведение физиологических условий гипоксии;
• тестирование лекарственных препаратов;
• создание моделей заболеваний;
• исследований в области радиации и апоптоза;
• дифференцировки и пролиферации стволовых клеток.

Специальные станции для создания условий гипоксии DY, Maworde дают возможность создать необходимые условия с максимальным контролем газового состава, влажности и температуры, что позволяет работать с различными объектами — клетками и животными в условиях контролируемой гипоксии. Размеры камеры и внутреннее пространство позволяют оператору производить все необходимые манипуляции или располагать нужные приборы внутри камеры.

Характеристики клеточной станции для создания условий гипоксии DY, Maworde

Точная система контроля:

• контроль O₂ от 0,0 до 20,9% с шагом 0,1%;
• контроль CO₂ от 0,03 до 20,0% с шагом 0,1%;
• калибровка в одно касание для датчиков O₂ и CO₂;
• контроль температуры: от 5 °C выше температуры окружающей среды до 45 °C с шагом 0,1 °C;
• контроль влажности в диапазоне: от уровня влажности в помещении до 75% с шагом 0,1%.

Легкое поддержание чистоты:

• верхняя, передняя и нижняя панели отлиты из цельного куска акрила для уменьшения образования конденсата и роста микробов;
• однородный уровень распределения газов внутри рабочей станции;
  
• встроенная высокоэффективная система фильтрации HEPA.
  

Удобство работы:

• эффективный вакуумный насос — прямой доступ к рабочей станции всего за 8-12 секунд;
• съемная передняя панель обеспечивает удобный доступ к внутренней части рабочей станции, что облегчает установку лабораторного оборудования;
  
• можно работать непосредственно в лабораторных перчатках;
• крышки портов для перчаток можно «припарковать» в специальных держателях;
• система регистрации данных USB с 3-месячным непрерывным хранением данных: время, дата, O₂ (заданное/фактическое), CO₂ (заданное/фактическое) и влажность (заданное/фактическое).

Таблица размеров клеточных станций для создания условий гипоксии DY, Maworde

		DY-M	DY-L	DY-XL	DY-D(Dual)	DY-XD(Dual)	DY-TM
Внешние размеры	В (мм)	600	600	770	600	770	770
	Ш (мм)	860	1160	1120	2000	2020	1460
	Д (мм)	660	660	660	660	780	660
Внутренние размеры	В (мм)	420	420	550	420	550	550
	Ш (мм)	500	800	760	800	760	1100
	Д (мм)	460	460	570	460	570	570
	Объем (л)	96	154	238	155	238	345
Внутренние размеры шлюза	В (мм)	245	245	245	245	290	245
	Ш (мм)	220	220	220	288	270	220
	Д (мм)	257	257	257	257	345	257
	Объем (л)	14	14	14	14	30	14
Вместимость чашек Петри (шт.)	Камера	350	520	720	1040	1440	1000
	Шлюз	44	44	44	44	99	44

Доступные дополнительные опции

• DY009 Порт для кабеля: облегчает интеграцию оборудования в рабочую станцию.
• DY014 Дистанционное управление с сигнализацией: позволяет контролировать параметры O₂, C O₂, температуры, влажности, давления газового баллона и утечек газа.
• DY016 Многоступенчатый цикл гипоксии: программирование нескольких гипоксических циклов с разными концентрациями O₂ и CO₂.
• DY004 Педаль продувки шлюза: для удобства работы — возможность продувки шлюза с помощью педали.
• DY017 Держатель для пипеток: держатель крепиться на боковую стенку для легкого доступа.
• DY008 Порт подключения вакуумной линии: упрощает утилизацию отходов и процессы очистки.
• DY003 Система для работы с высокой концентрацией кислорода: возможность создавать условия для эксперимента с высокой концентрацией кислорода.
• DY015 Система поддержания низкой температуры: контролируемая система охлаждения с задаваемыми параметрами.
• GC-HT Система поддержания высокой температуры: обеспечивает контролируемую высокотемпературную среду (до 55 °C) для экспериментов.
• DY002 Анаэробная система: объединяет гипоксию и анаэробные условия в одной рабочей станции.
• Возможность заказа станции гипоксии по заданным размерам.

Типы клеточных станций для создания условий гипоксии DY, Maworde

Клеточная станция для создания условий гипоксии DY, Maworde, одинарная — DY-M, DY-L, DY-XL.

Станция имеет два стандартных порта, контроллер и шлюз. В камере можно создать разные условия газового состава для культивирования клеток.

Клеточная станция для создания условий гипоксии DY, Maworde, двойная — DY-D(Dual), DY-XD(Dual).

Станция имеет две отдельные камеры, с одним контроллером и общим шлюзом. В каждой камере можно создать разные условия газового состава и проводить эксперименты одновременно. Станция подходит для работы с клетками и доступна в двух вариантах, отличающихся размерами.

Клеточная станция для создания условий гипоксии DY, Maword, с тремя портами — DY-TM.

Станция с большим объемом позволяет разместить внутри оборудование или просто увеличить зону для инкубации. Дополнительный порт дает возможность полного доступа ко всему пространству камеры.

Пропидий йодид (Propidium iodide, PI) — это краситель, аналогичный бромистому этидию, используемый в молекулярной биологии и цитометрии для окрашивания клеток. Он проникает только в клетки с нарушенной мембраной, что делает его полезным для определения клеточной жизнеспособности и оценки апоптоза (программируемой клеточной смерти). Пропидий йодид связывается с ДНК и дает красный флуоресцентный сигнал, который можно обнаружить с помощью флуоресцентной микроскопии или поточной цитометрии.

Эта способность PI применяется в комбинации с флуоресцентными зондами, типа Calcein-AM, FDA, для изучения неживых клеток. В проточной цитометрии применяется при обнаружении и изучении относительного количественного апоптоза и клеточного цикла. Комплексное соединение PI-двуцепочечная ДНК имеет длины волна возбуждения / испускания — макс. 535 / 615 нм.

Набор для определения апоптотических клеток содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических и некротических клеток с помощью аннексина V, конъюгированного с AF488, и йодистого пропидия.

AF488 — сульфированный родамин, яркий, фотостабильный и гидрофильный флуорофор. Краситель излучает в зеленом (FITC) канале.

• Максимум поглощения, нм — 495;
• максимум эмиссии, нм — 519.

Йодистый пропидий (PI) — непроницаемый через плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале.

• Максимум поглощения, нм — 535;
• максимум эмиссии, нм — 617.

Состав набора для определения апоптотических клеток с помощью аннексина V-AF488

• Аннексин V, AF488 конъюгат, мкг – 5;
• Propidium Iodide solution, 0,1 мг/мл, мкл – 100;
• Annexin V Binding Buffer, 5x, мл – 15.

Условия транспортировки и хранения

• Транспортировка – до трех недель при комнатной температуре;
• хранение, °С – -20°С;
• срок хранения – 12 месяцев.

Рекомендуемые концентрации аннексина V-AF488 — от 2 до 5 мкг/мл, в зависимости от исследуемой клеточной культуры. Перед экспериментом необходимо опробовать разные разведения аннексина V-AF488 для определения оптимальной концентрации.

Окрашивание с помощью йодистого пропидия — опционально. Этот этап можно пропустить, если в задачах нет необходимости исследовать некроз.

Важно! Аннексин V можно использовать в качестве маркера апоптоза только в клетках с интактной плазматической мембраной. При нарушении целостности плазматической мембраны аннексин V может связываться с ФС внутри клетки и давать ложноположительный результат.

Применение набора для определения апоптотических клеток с помощью аннексина V-AF488

Приготовление растворов

1. Растворите содержимое пробирки с лиофилизированным аннексином V-AF488 в 250 мкл деионизованной воды.

Важно! Разведенный рекомбинантный белок необходимо хранить защищенным от света при температуре 2-8°C. В растворе конъюгат стабилен в течение месяца. При длительных экспериментах рекомендуется приготовить аликвоты и хранить их при температуре −20°С. Избегать повторного замораживания!

2. Приготовьте необходимый объём 1х буфера для связывания, смешав 1 часть 5х буфера для связывания с 4 частями деионизованной воды.

Окрашивание клеток

1. Адгезированные клетки аккуратно снимите с поверхности роста подходящим способом. С суспензионными клетками начинайте работу со следующего пункта.2. Промойте клетки один раз охлаждённым PBS (рН7.4) и один раз 1х буфером для связывания.

3. Ресуспензируйте клетки в холодном 1х буфере для связывания.

4. Отберите 100 мкл суспензии клеток (от 1×105 до 1×106 клеток/мл) в микроцентрифужные пробирки объемом 1.5 мл. Для проточной цитометрии необходимо заготовить дополнительные пробирки с соответствующими контролями (см. описание контролей ниже).

5. Добавьте 2-5 мкл раствора аннексина V-AF488 в каждую пробирку, инкубируйте в течение 10-15 мин при комнатной температуре в защищенном от света месте.

6. Без предварительной отмывки добавьте 400 мкл 1x буфера для связывания в каждую пробирку.

7. (Опционально) Добавьте 5 мкл йодистого пропидия в каждую пробирку с клетками. Аккуратно перемешайте содержимое пробирки и инкубируйте в течение 5 мин при комнатной температуре в защищенном от света месте.

Важно! Не промывайте клетки от йодистого пропидия. Йодистый пропидий должен оставаться в буфере во время сбора данных.

8. Окрашенные клетки храните при температуре 2-8°C в защищенном от света месте до проведения анализа.

Важно! Количественное определение клеток методом проточной цитометрии или флуоресцентной микроскопии необходимо производить в течение 4 ч от начала окрашивания из-за негативного воздействия йодидистого пропидия на жизнеспособность клеток.

Проточная цитометрия

1. Для цитофлуориметрического анализа апоптоза и некроза клеток с помощью аннексина V-AF488 и йодистого пропидия помимо целевого окрашивания необходимо приготовить контроли: неокрашенные клетки (отрицательный контроль для настройки прибора); клетки, окрашенные только аннексином V-AF488, и клетки, окрашенные только йодистым пропидием (для настройки компенсации).

2. Анализ связывания аннексина V-AF488 проводят с использованием детектора сигнала FITC.

3. Анализ клеток, окрашенных йодистым пропидием, осуществляют с помощью детектора сигнала фикоэритрина.

Флуоресцентная микроскопия

1. Отберите каплю суспензии с окрашенными клетками и поместите ее на предметное стекло. Накройте клетки покровным стеклом.

2. В качестве альтернативы, адгезированные клетки можно окрашивать непосредственно на покровном стекле. После окрашивания переверните покровное стекло на предметное, так, чтобы клетки находились между предметным и покровным стёклами.

3. (Опционально) Клетки после окрашивания аннексином V, перед визуализацией можно промыть 1х буфером для связывания и зафиксировать в 2% параформальдегиде. Не фиксируйте клетки перед инкубацией с аннексином V-AF488, поскольку любое нарушение клеточной мембраны может вызвать неспецифическое связывание аннексина V с ФС на внутренней поверхности клеточной мембраны.

4. Исследование клеток под флуоресцентным микроскопом осуществляют, используя двойной набор фильтров для FITC и родамина.

Результат окрашивания

• Ранние апоптотические клетки, связавшие аннексин V-AF488, окрашиваются в зеленый цвет в плазматической мембране.
• Некротические клетки в результате проникновения йодистого пропидия внутрь клетки будут окрашены красным.
• Апоптотические клетки с нарушенной в результате вторичного некроза целостностью мембраны будут иметь красное окрашивание (йодистый пропидий) и ореол зеленого окрашивания (AF488) на клеточной поверхности (плазматическая мембрана).
• Здоровые клетки будут лишены окрашивания.

Соотношение экспрессии BAX/BCL2 является важным показателем для выяснения судьбы клеток, подвергающихся апоптозу в различных исследованиях, включая изучение рака, поиск терапевтических агентов и оценку терапевтического ответа. Данная панель используется в качестве маркера апоптоза.

Характеристики панели антител Apoptosis Marker Antibody Duo (Bcl2, Bax)

• Компоненты панели антител – антитела anti-Bax antibody кроличьи, поликлональные (50 мкл), антитела anti-Bcl 2 antibody кроличьи, поликлональные (50 мкл);
• условия транспортировки, °C – +2-8;
• условия хранения, °C – - 20 (в виде аликвот).

Публикации

Данная панель антител использована в следующих статьях:

1. Orlistat Resensitizes Sorafenib-Resistance in Hepatocellular Carcinoma Cells through Modulating Metabolism

ARG55188:WB / Human

Pei-Wei Shueng et al.
International Journal of Molecular Sciences, (2022)

2. Naringin Interferes Doxorubicin-Induced Myocardial Injury by Promoting the Expression of ECHS1

ARG55188: WB / Rat

Zirui Zhao et al.
Front Pharmacol., (2022)

3. Preclinical Therapeutic Assessment of a New Chemotherapeutics [Dichloro(4,4'-Bis(2,2,3,3-Tetrafluoropropoxy) Methyl)-2,2'-Bipryridine) Platinum] in an Orthotopic Patient-Derived Xenograft Model of Triple-Negative Breast Cancers

ARG55188, ARG65612: WB / Human

Tzu-Chun Kan et al.
Pharmaceutics., (2022)

4. Kansuinine A Ameliorates Atherosclerosis and Human Aortic Endothelial Cell Apoptosis by Inhibiting Reactive Oxygen Species Production and Suppressing IKKβ/IκBα/NF-κB Signaling

ARG65612: WB / Human

Chen-Sheng Chen et al.
Int J Mol Sci., (2021)

5. Circ_0081572 inhibits the progression of periodontitis through regulating the miR-378h/RORA axis.

ARG55188: WB / Human

Jing Wang et al.
Arch Oral Biol., (2021)

6. Dapagliflozin Improves Cardiac Hemodynamics and Mitigates Arrhythmogenesis in Mitral Regurgitation-Induced Myocardial Dysfunction.

ARG55188: WB / Rat

Yu-Wen Lin et al.
J Am Heart Assoc., (2021)

7. Xenogeneic and Allogeneic Mesenchymal Stem Cells Effectively Protect the Lung Against Ischemia-reperfusion Injury Through Downregulating the Inflammatory, Oxidative Stress, and Autophagic Signaling Pathways in Rat.

ARG55188: WB / Human

Kun-Chen Lin et al.
Cell Transplant., (2020)

8. Multi-omics analysis of pathological changes in the amygdala of rats subjected to chronic restraint stress.

ARG65612: WB / Rat

Zhonghua Li et al.
Behav Brain Res., (2020)

9. Possible Involvement of PTEN Signaling Pathway in the Anti-apoptotic Effect of Electroacupuncture Following Ischemic Stroke in Rats

ARG55188: WB / Rat

Xing Ying et al.
Cell Mol Neurobiol., (2018)

10. Electroacupuncture Alleviated Neuronal Apoptosis Following Ischemic Stroke in Rats via Midkine and ERK/JNK/p38 Signaling Pathway.

ARG55188: WB / Rat

Xing Ying et al.
J Mol Neurosci., (2018)

11. A LY-15, a novel cyclic pentapeptide that inhibits B16 cell proliferation and migration and induces cell apoptosis.

ARG55188, ARG65612: WB / Mouse

Wang Xuan et al.
Oncology Letters., (2018)

Набор позволяет количественно измерить одновременно два параметра клеточного здоровья: деполяризацию мембран митохондрий (считается ранним признаком апоптоза) и клеточную гибель (по проникновению в клетки 7-AAD). Протокол без этапов отмывки клеток от реагентов позволяет быстро получить статистически надежные результаты по процентному соотношению и концентрации клеток: живых, с деполяризованной митохондриальной мембраной, на стадии позднего апоптоза (с деполяризованной митохондриальной и поврежденной цитоплазматической мембранами) и мертвых.

Наборы Muse характеризуются максимально упрощенной пробоподготовкой, они оптимизированы для использования на клеточном анализаторе Muse, но совместимы также с другими проточными цитометрами (при наличии соответствующего лазера и светофильтров*).

* Пожалуйста, уточняйте возможность использования набора на вашем проточном цитометре у специалиста Диаэм Александра Шумеева

Данный набор представляет собой комбинацию сразу 2-х популярных флуоресцентных красителей

Пропидий йодид (Propidium iodide, PI) — это краситель, используемый в молекулярной биологии и цитометрии для окрашивания клеток. Он проникает только в клетки с нарушенной мембраной, что делает его полезным для определения клеточной жизнеспособности и оценки апоптоза (программируемой клеточной смерти). Пропидий йодид связывается с ДНК и дает красный флуоресцентный сигнал, который можно обнаружить с помощью флуоресцентной микроскопии или поточной цитометрии.

Кальцеин АМ (Calcein AM) — это флуоресцентный индикатор, который используется для оценки жизнеспособности клеток эукариот и измерения внутриклеточной концентрации кальция. Он является неактивной формой (AM-эфиром), которая проникает через клеточную мембрану. После попадания внутрь клетки, кальцеин АМ активируется клеточными эстеразами, что приводит к образованию синего флуоресцентного кальцеина, который связывается с ионами кальция.

Мертвые клетки лишены эстеразы, которая не может гидролизовать кальцеин AM в кальцеин, и поэтому мертвые клетки не светятся.

Таким образом, сочетание кальцеина-AM с PI позволяет проводить окрашивание как живых, так и мертвых клеток.

Проточный цитометр SinoCyte от BioSino представляет собой высокопроизводительную, компактную и удобную в использовании систему с поддержкой до трех каналов и 15 параметров флуоресценции. Благодаря широкому спектру применения проточный цитометр SinoCyt является мощным инструментом для исследователей в различных областях, включая онкологию, иммунологию, исследования стволовых клеток, клеточную биологию, океанографию, мониторинг окружающей среды и клиническую диагностику.

Области применения

• Онкология и гематология: анализ клеток крови, обнаружение дендритных клеток, цитотоксических Т-клеток, Т-клеточных рецепторов и Р-селектина.
• Иммунология: обнаружение пролиферирующих Т-клеток, изотипов иммуноглобулинов, NK-клеток и регуляторных Т-клеток.
• Стволовые клетки: анализ гемопоэтических стволовых клеток, обнаружение CAR-T-клеток и анализ мезенхимальных стромальных клеток
• Клеточная биология: клеточная пролиферация, клеточный цикл и анализ апоптоза.
• Океанография: обнаружение морских микроорганизмов, количественный анализ ДНК и определение содержания липосом в морских водорослях.
• Мониторинг окружающей среды: обнаружение живых и мертвых бактерий, абсолютное количественное определение вирусов, бактерий и микроводорослей, выявление бактериальной плоидности и классификация микроводорослей.
• Клиническая диагностика: анализ субпопуляций лимфоцитов, нейтрофилов регуляторных Т-клеток, активация Т-клеток, определение блокирующих антител, определение цитокинов, подсчет гемопоэтических стволовых клеток, иммунофенотипирование лимфом, анализ клеточного цикла и полиплоидии, выявление очагов лейкемии.

Технические характеристики

• Лазеры — до 3х одновременно из 3 доступных: 405 нм (100 мВт), 488 нм (60 мВт), 637 нм (80 мВт);
• каналы детекции:
• 488 лазер: FSC, SSC, 525 нм, 575 нм, 620 нм, 697 нм, 780 нм (7 параметров);
• 638 лазер: 670 нм, 720 нм, 780 нм (3 параметра);
• 405 лазер: 425 нм, 460 нм, 525 нм, 605 нм, 660 нм, 720 нм, 780 нм, VSC 8 параметров), VSC (Violet side scater);
• чувствительность, MESF¹ — FITC <50; PE <30; APC <30;
• формат загрузки — пробирки размерами от 17 x 100 мм до 8,5 x 45 мм (включая стандартные пробирки на 1,5, 2 и 5 мл), опциональный автозагрузчик для 40- и 96-луночных планшетов;
• размер частиц от 0,2 до 50 мкм;
• скорость сбора данных, события / с — до 50000;
• скорость потока, мкл / сек — 15-120;
• метод определения концентрации клеток — прямой подсчет;
• габариты, Ш × Г × В — 760 × 450 × 470 мм;
• вес, кг — 40.

¹MESF, molecules of equivalent soluble fluorochrome — число молекул эквивалентного растворимого флуорохрома.

Таблица. Конфигурации прибора

Лазер	Канали детекции	Фильтры	Красители	3 лазера. Макс. 15 цветов	2 лазера. Макс. 8 цветов	1 лазер. Макс. 5 цветов
488 нм	BL1	525/40	FITC, EGFP, BB515 Alexa Fluor 488	√	√	√
	BL2	575/30	PE, DsRed	√	√	√
	BL3	620/30	PE-Texas Red, ECD, PE-CF594, PI, 7-AAD	√	√	√
	BL4	697/60	PerCP, PE-Cy5, PE-Cy5.5, BB700, PerCP-eFlour710	√	√	√
	BL5	780/60	PE-Cy7, PE-Alexa Fluor 750	√	√	√
638 нм	RL1	670/20	APC, Cy5, Alexa Fluor 647	√	√
	RL2	720/40	APC-R700, Alexa Fluor 680, Alexa Fluor 700	√	√
	RL3	780/60	APC-Cy7, APC-eFluor 780, APC-H7	√	√
	VL1	425/20	BV421		√
	VL2	460/40	Pcific Blue, V450, BV480		√
405 нм	VL3	525/40	BV510, V500		√
	VL4	605/40	BV605		√
	VL5	660/40	BV650		√
	VL6	720/40	BV711		√
	VL7	780/60	BV768, BV750		√

Краситель НК Hoechst 33258 является популярным ядерным контрастирующим веществом, который испускает синюю/голубую флуоресценцию при связывании с дцДНК. Его использование аналогично Hoechst 33342 (H-1399) для изучения окрашивания, апоптоза и клеточного цикла, но Hoechst 33258, по сообщениям, хуже проникает в клетки. Этот краситель также доступен в растворе (H-3569).

• Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 352 (УФ).
• Длина волны испускания флуоресценции, нм — 461 (зеленый).

Это надёжная компактная система мультиплексного анализа исследовательского класса, совместимая с магнитными частицами xMAP (MagPlex).

Области применения:

• изучение иммунного статуса;
• анализ маркеров дисфункции эндокринной системы;
• анализ маркеров острой фазы воспалительных процессов;
• анализ онкомаркеров и онкодиагностика;
• маркеры апоптоза;
• ангиогенез.

Преимущества:

• позволяет одновременно определять до 50 мишеней в одном образце;
• улучшенная производительность и удобство мультиплексного анализа с использованием магнитных частиц;
• настольное и компактное исполнение системы;
• экономия на обслуживании системы и ценных реагентах;
• ПО Bio-Plex Manager 6.1 для анализа данных и оптимизации результатов.

Технические характеристики:

• скорость анализа, мин/планшет – 60;
• 96-луночный формат системы;
• 2 светодиодных лазера с длинами волн 532 и 635 нм;
• габариты, ШxГxВ, см – 16,5 x 60 x 43.

Реагенты и наборы для проведения исследований – по запросу.

Краситель НК Hoechst 33258 является популярным ядерным контрастирующим веществом, который испускает синюю/голубую флуоресценцию при связывании с дцДНК. Его использование аналогично Hoechst 33342 (H-1399) для изучения окрашивания, апоптоза и клеточного цикла, но Hoechst 33258, по сообщениям, хуже проникает в клетки. Этот краситель также доступен в растворе (H-3569).

• Длина волны возбуждения флуоресценции, нм — 352 (УФ).
• Длина волны испускания флуоресценции, нм — 461 (зеленый).

Проточный цитометр SinoCyte X — это новейшая версия проточных цитометров компании BioSino, с возможностью установки 4× лазеров и до 21 канала флуоресцентной детекции.

Области применения

• Онкология и гематология: анализ клеток крови, обнаружение дендритных клеток, цитотоксических Т-клеток, Т-клеточных рецепторов и Р-селектина.
• Иммунология: обнаружение пролиферирующих Т-клеток, изотипов иммуноглобулинов, NK-клеток и регуляторных Т-клеток.
• Стволовые клетки: анализ гемопоэтических стволовых клеток, обнаружение CAR-T-клеток и анализ мезенхимальных стромальных клеток.
• Клеточная биология: клеточная пролиферация, клеточный цикл и анализ апоптоза.
• Океанография: обнаружение морских микроорганизмов, количественный анализ ДНК и определение содержания липосом в морских водорослях.
• Мониторинг окружающей среды: обнаружение живых и мертвых бактерий, абсолютное количественное определение вирусов, бактерий и микроводорослей, выявление бактериальной плоидности и классификация микроводорослей.
• Клиническая диагностика: анализ субпопуляций лимфоцитов, нейтрофилов регуляторных Т-клеток, активация Т-клеток, определение блокирующих антител, определение цитокинов, подсчет гемопоэтических стволовых клеток, иммунофенотипирование лимфом, анализ клеточного цикла и полиплоидии, выявление очагов лейкемии.

Технические характеристики

• Лазеры — до 4× одновременно: 405 нм (100 мВт), 488 нм (60 мВт), 637 нм (80 мВт) и 561 нм;
• каналы детекции:
• 488 лазер: FSC, SSC, 525 нм, 575 нм, 620 нм, 697 нм, 780 нм (7 параметров);
• 638 лазер: 670 нм, 720 нм, 780 нм (3 параметра);
• 405 лазер: 425 нм, 460 нм, 525 нм, 605 нм, 660 нм, 720 нм, 780 нм, VSC (Violet side scater), (8 параметров);
• 561 лазер: 582 нм, 620 нм, 660 нм, 695 нм, 730 нм, 780 нм (8 параметров);
• чувствительность, MESF¹ — FITC <50; PE <30; APC <30;
• формат загрузки — пробирки размерами от 17 x 100 мм до 8,5 × 45 мм (включая стандартные пробирки на 1,5, 2 и 5 мл), опциональный автозагрузчик для 40- и 96-луночных планшетов;
• размер частиц от 0,2 до 50 мкм;
• скорость сбора данных, события / с — до 80 000;
• скорость потока, мкл / сек — 15-120;
• метод определения концентрации клеток — прямой подсчет;
• габариты, Ш×Г×В — 760×450×470 мм;
• вес, кг — 40.

¹MESF, molecules of equivalent soluble fluorochrome — число молекул эквивалентного растворимого флуорохрома.

Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа (сокращенно GAPDH или реже G3PDH) представляет собой фермент массой ~37 кДа, который катализирует шестую стадию гликолиза и, таким образом, служит для расщепления глюкозы на молекулы энергии и углерода. В дополнение к этой давно установленной метаболической функции, GAPDH недавно был вовлечен в несколько не метаболических процессов, включая активацию транскрипции, инициацию апоптоза, перемещение ER в везикулы Гольджи и быстрый аксональный или аксоплазматический транспорт.

Характеристики антитела Anti-GAPDH

• Кроличье моноклональное антитело к GAPDH;
• полное название белка — глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа;
• синонимы — GAPDH, GAPD, G3PD, HEL-S-162eP, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа;
• иммуноген — кнъюгированный с KLH синтетический пептид, соответствующий мышиному GAPDH;
• изотип: IgG1;
• метод очистки — аффинная хроматография;
• субклеточная локализация: цитоплазма, ядро, мембрана;
• хранение при -20 °С;
• срок годности 12 месяцев.

Аденилаткиназы участвуют в регуляции состава адениновых нуклеотидов в клетке, катализируя обратимый перенос фосфатных групп между адениновыми нуклеотидами. У позвоночных идентифицированы три изофермента аденилаткиназы, а именно 1, 2 и 3; этот ген кодирует изофермент 2. Экспрессия этих изоферментов является тканеспецифичной и регулируется в процессе развития. Изофермент 2 локализуется в митохондриальном межмембранном пространстве и может играть роль в апоптозе. Мутации в этом гене являются причиной ретикулярной дисгенезии. Альтернативный сплайсинг приводит к множественным вариантам транскриптов. Псевдогены этого гена находятся на хромосомах 1 и 2.

Характеристики антител AK2

• Видовая специфичность – человек, мышь, крыса;
• применение – WB, IHC;
• условия транспортировки, °C – +2-8;
• условия хранения, °C – - 20 (в виде аликвот).

	Вестерн-блот анализ экстрактов различных клеточных линий с использованием антитела AK2 (A6519) в разведении 1:1000. Вторичное антитело: HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Лизаты/белки: 25 мкг на дорожку. Блокирующий буфер: 3% обезжиренное сухое молоко в TBST. Обнаружение: базовый комплект ECL (RM00020). Время выдержки: 90 с.
	Вестерн-блот анализ экстрактов нормальных (контрольных) и клеток с нокаутом AK2 (KO) 293T с использованием антитела AK2 (A6519) в разведении 1:1000. Вторичное антитело: HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Лизаты/белки: 25 мкг на дорожку. Блокирующий буфер: 3% обезжиренное сухое молоко в TBST. Обнаружение: базовый комплект ECL (RM00020). Время экспозиции: 90 с.

Проточный цитометр Attune CytPix для широкого спектра задач – компактный, простой, удобный в использовании.

С помощью изображений полученных Attune CytPix можно оценит морфологию клеток, отслеживать контаминацию, показать межклеточные взаимодействия, морфологические характеристики апоптотических клеток и убедиться, что через луч лазера проходит отдельная клетка, а не конгломераты, их обломки или мусор, а так же можно просматривать и группировать изображения.

Уникальные особенности проточного цитометра Attune CytPix

• Возможность протокола анализа без лизиса и отмывок для минимизации потери клеток, и экономии время, а также упрощение подготовки;
• снижение времени пробоподготовки на 65%;
• характеристика клеточных популяций;
• стабильное качество изображения при высокой скорости потока;
• описание морфологии апоптотических клеток;
• исследование межклеточных взаимодействий;
• контроль качества клеточных культур, отслеживание контаминации;
• просмотр и группировка изображений, а также определение типов клеток;
• визуализация для подтверждения и настройки гейта, включая только отдельные клетки, представляющие интерес;
• система очистки, которая механически уменьшает возникновение засорения.

Протоколы подготовки образцов.

Примеры использования проточного цитометр Attune CytPix

Рисунок 1. Ядра эритроцитов курицы (CEN) склонны слипаться в дублеты или другие агрегаты. Стратегия гейтирования слипшихся ядер эритроцитов курицы с Attune CytPix.

Рисунок 2. С помощью проточного цитометра Attune CytPix можно просматривать и группировать изображения, а также определять типы клеток E. coli на основе их морфологических характеристик. В течении роста клетки E. coli, развиваются в два типа колониеобразующих клеток - короткие, которые напоминают отдельные клетки, и удлиненные структуры.

Рисунок 3. Отслеживание контаминации критически важно для анализа клеточных линий. На пример, перед трансплантацией клеток Вы можете их проверить на контаминацию с помощью Attune CytPix.

Рисунок 4. Визуализация Attune CytPix показывает межклеточные взаимодействия на примере CAR T-клеток, нацеленных на клетки лимфомы.

Рисунок 5. Анализ апоптоза клеток (с использованием аннексина V и PI) дополняется изображениями с выявленным морфологическим особенностями каждой клетки. Морфологические характеристики апоптотических клеточных популяции, полученные проточным цитометром Attune CytPix.

Особые преимущества проточного цитометра с визуализацией Attune CytPix

• Программное обеспечение и камера проточного цитометра Attune CytPix гарантируют, что события, которые анализируются, являются отдельными клетками, а не дублетами, скоплениями, обломками клеток или мусором.
• Акустическая фокусировка в 10 раз быстрее любой другой в проточном цитометре Attune CytPix.

Гидродинамическая фокусировка обеспечивает точное позиционирование клеток по центральной оси, позволяя клеткам быть сосредоточенными на точку лазерного луча и совместно с высокоскоростной камерой обеспечивает качественную картинку (Рисунок 6).

Проточный цитометр Attune CytPix с высокоскоростной камерой имеет большое значение для исследования в области клеточной биологии, генной терапии и оптимизации их протоколов.

Рисунок 6. Акустическая фокусировка в сравнении с традиционной гидродинамической фокусировкой.

Рисунок 7. Стабильное качество изображения при высокой скорости потока 12,5 мик/мин, 25 мик/мин, 100 мик/мин, 200 мик/мин, 500 мик/мин и 1000 мик/мин. Нет изменений в частоте визуализации и получению картин. Простая настройка фокуса и камеры для получения качественного изображения.

Технические характеристики проточного цитометра Attune CytPix

• Количество лазеров – 2/4;
• каналы детекции – канал прямого и бокового светорассеяния и 14 флуоресцентных каналов;
• освещение изображения – 405 нм лазер с менее 50 наносекундный импульс;
• акустическая фокусировка;
• чувствительность – ≤80 MESF for FITC, ≤30 MESF for PE, ≤70 MESF for APC;
• скорость анализа, событий/сек – более 35 тыс.;
• скорость фотографии, фото/сек – 6000;
• кратность увеличения – 20×;
• разрешение камеры, нм/Мп – 0,3;
• размер частиц, нм – до 800;
• статус использования – только для исследований;
• программное обеспечение – Invitrogen Attune 21 CFR Part 11;
• процессор – Nvidia Quadro P2200 GPU;
• жесткий диск – 2 x 8TB SSD, 2,5-inch Samsung 870 QVO, 560 MB/s;
• габариты, В × Ш × Г, см – 49 × 58 × 43.

Опции: автоподатчик Invitrogen CytKick Autosampler и робот подачи планшетов Orbitor RS2 Microplate Mover увеличат операционную мощность, уменьшат количество ошибок, связанных с человеческим фактором.

Рисунок 8. Дополнительные конфигурации увеличивают операционную мощность, уменьшают количество ошибок, связанных с человеческим фактором.
(A) Attune CytPix Flow Cytometer
(B) Invitrogen CytKick Autosampler
(C) Orbitor RS2 Microplate Mover

Таблица 1. Сравнение автосэмплеров Invitrogen CytKick и CytKick Max

Характеристика	Автосэмплер CytKick	Автосэмплер CytKick Max
Пропускная способность	42 мин для 96-луночного планшета в высокопропускном режиме	22 мин для 96-луночного планшета (в ускоренном режиме с одной промывкой, одного смешивания и полного анализа образца 20 мкл)
Совместимость	96-луночные глубоколуночные планшеты 96-луночные стандартные планшеты 384-луночные глубоколуночные планшеты 384-луночные стандартные планшеты	96-луночные глубоколуночные планшеты 96-луночные стандартные планшеты 384-луночные глубоколуночные планшеты 384-луночные стандартные планшеты 1,5 и 2 мл микроцентрифужные пробирки в шативе (до 24 мест) 96-луночные планшеты, запечатанные фольгой 384-луночные планшеты, запечатанные фольгой, дополнительные типы планшет

Таблица 2. Конфигурации цитометра Attune CytPix.

Лазеры	Конфигурация лазеров	Число каналов детекции для выбранных лазеров				Всего каналов детекции*	Каталожный номер
		Фиолетовый, 405 нм	Синий, 488 нм	Желтый, 561 нм	Красный, 637 нм
2	Синий / желтый	†	3	4	†	9	A51842
	Синий / красный	†	4	†	3	9	A51840
	Синий / фиолетовый	4	4	†	†	10	A51841
	Синий / фиолетовый 6	6	4	†	†	11	A51843
3	Синий / красный / желтый	†	3	4	3	12	A51845
	Синий / фиолетовый /желтый	4	3	4	†	13	A51846
	Синий / красный / фиолетовый	4	4	†	3	13	A51844
	Синий / красный / фиолетовый 6	6	3	†	3	14	A51847
4	Синий / красный / желтый / фиолетовый	4	3	4	3	16	A51848
	Синий / красный / желтый / фиолетовый 6	6	2	3	3	16	A51849

* - Число каналов детекции включает все каналы флюоресценции, а также каналы прямого и бокового рассеяния.

† - Доступна модификация лазеров, зеленый лазер не доступен в Attune CytPix.

Таблица 3. Конфигурация лазеров, количество каналов детекции в сравнении Attune CytPix с Attune NxT

Лазеры	Конфигурация лазеров	Фиолетовый, 405 нм	Синий, 488 нм	Желтый, 561 нм	Зеленый, 532 нм	Красный, 637 нм	Всего каналов детекции*	Attune CytPix	Attune NxT
1	Синий	**	4	**	**	**	6	N/A	A24864
2	Синий / зеленый	**	3		4	**	9	N/A	A28995
	Синий / желтый	**	3	4		**	9	A51842	A24861
	Синий / красный	**	4	**	**	3	9	A51840	A24863
	Синий / фиолетовый	4	4	**	**	**	10	A51841	A24862
	Синий / фиолетовый 6	6	3	**		**	11	A51843	A29002
3	Синий / зеленый / красный	**	3		4	3	12	N/A	A28997
	Синий / красный / желтый	**	3	4		3	12	A51845	A28993
	Синий / зеленый / фиолетовый	4	3		4	**	13	N/A	A28999
	Синий / фиолетовый / желтый	4	3	4		**	13	A51846	A24859
	Синий / красный / фиолетовый	4	4	**	**	3	13	A51844	A24860
	Синий / красный / фиолетовый 6	6	3	**		3	14	A51848	A29003
4	Синий / красный / фиолетовый / зеленый	4	3		4	3	16	N/A	A29001
	Синий / красный / желтый / фиолетовый	4	3	4		3	16	A51848	A24858
	Синий / красный / желтый / фиолетовый 6	6	2	3		3	16	A51849	A29004

* - Число каналов детекции включает все каналы флюоресценции, а также каналы прямого и бокового рассеяния.

** - Доступна модификация лазеров, зеленый лазер не доступен в Attune CytPix.

Выбрать можно конфигурацию прибора, соответствующую вашим потребности. Проточный цитометр Attune CytPix доступен в конфигурациях с 2–4 лазерами с визуализацией в светлом поле, а проточный цитометр Attun NxT доступен с 1–4 лазерами без визуализации.

Таблица 4. Выбор красителей для определения жизнеспособности клеток

Лазер	Нефиксирующие красители	Фиксирующие красители
УФ	DAPI (470)	LIVE / DEAD Fixable Blue (450)
405 нм	SYTOX Blue (480)	LIVE / DEAD Fixable Violet (451)
		LIVE / DEAD Fixable Lime (506)
		LIVE / DEAD Fixable Aqua (526)
		LIVE / DEAD Fixable Yellow (575)
405 нм	SYTOX Green (523)	LIVE / DEAD Fixable Green (520)
	Propidium Iodide (617)	LIVE / DEAD Fixable Olive (557)
	SYTOX AADvanced (647)	LIVE / DEAD Fixable Red (615)
561 нм	SYTOX Orange (570)	LIVE / DEAD Fixable Orange (602)
	SYTOX AADvanced (647)
633/5 нм	SYTOX Red (660/20*)	LIVE / DEAD Fixable Far Red (665)
		LIVE / DEAD Fixable Scarlet (723)
		LIVE / DEAD Fixable Near IR (775)
		LIVE / DEAD Fixable Near IR (780)
808 нм		LIVE / DEAD Fixable Near IR (876)

Этот ген кодирует белок, который является членом семейства протеаз цистеин-аспарагиновой кислоты (каспаз). Последовательная активация каспаз играет центральную роль в фазе исполнения клеточного апоптоза. Каспазы существуют в виде неактивных проферментов, которые подвергаются протеолитическому процессингу консервативных остатков аспарагиновой кислоты с образованием двух субъединиц, большой и малой, которые димеризуются с образованием активного фермента. Этот белок расщепляет и активирует каспазы 6, 7 и 9, а сам белок процессируется каспазами 8, 9 и 10. Это основная каспаза, участвующая в расщеплении белка-предшественника амилоида-бета 4А, что связано с гибелью нейронов у Болезнь Альцгеймера. Альтернативный сплайсинг этого гена приводит к двум вариантам транскриптов, кодирующим один и тот же белок. [предоставлено RefSeq, июль 2008 г.]

Характеристики антител

• Видовая специфичность – человек, мышь, крыса;
• применение – WB, IF;
• условия транспортировки, °C – +2-8;
• условия хранения, °C – - 20 (в виде аликвот).

	Вестерн-блот-анализ экстрактов различных клеточных линий с использованием активного антитела + про-каспаза-3 (A19654) в разведении 1:1000. Вторичное антитело: HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Лизаты/белки: 25 мкг на дорожку. Блокирующий буфер: 3% обезжиренное сухое молоко в TBST. Обнаружение: базовый комплект ECL (RM00020). Время экспозиции: 90 c.
	Вестерн-блот-анализ экстрактов различных клеточных линий с использованием активного антитела + про-каспаза-3 (A19654) в разведении 1:1000. Вторичное антитело: HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Лизаты/белки: 25 мкг на дорожку. Блокирующий буфер: 3% обезжиренное сухое молоко в TBST. Обнаружение: базовый комплект ECL (RM00020). Время экспозиции: 3 мин.

Простой, удобный в работе проточный цитофлуориметр 7S, от китайской компании BioSino, способен обеспечить до 95% потребностей клеточной лаборатории в области клеточного анализа. Прибор имеет один синий лазер (488 нм), но, несмотря на это, обеспечивает до 7 каналов флуоресцентной детекции и обладает высокой чувствительностью детекции и простым ПО, что делает получение результатов быстрым и максимально комфортным.

7S позволяет реализовать все базовые методы цитометрии в лаборатории: анализ клеточного апоптоза и аутофагии, оценка эффективности трансфекции и уровня экспрессии, изучить фенотипы и субпопуляции лимфоцитов, провести HLA-типирование или анализ индекса фрагментации ДНК спермы человека, а также изучить плоидность растений.

Цитофлуориметр 7S оснащен синим аргоновым лазером 488 нм (50 мВт) и системой детекции из 7 сверхчувствительных светодиодных детекторов, которые регистрируют 5 флуоресцентных сигналов, а также прямое (FSC*) и боковое светорассеяния (SSC**).

Система детекции позволяет работать как с самыми популярными красителями (FITC, Alexa 488, PE, PI), так и тандемными красителями (PE-Texas Red, PE-Cy5, PE-Cy5.5, PE-Cy7), что позволяет реализовать простые мультиплексные эксперименты.

Демонстрация прибора

Прибор имеется на складе, есть возможность запросить демонстрацию на рабочем месте заказчика. Форма заказа доступна по кнопке «Заказать демо».

Технические характеристики цитофлуориметра 7S

• Автоматический забор проб с функцией автоматического промешивания;
• ПО на английском языке;
• сбор данных / компенсация флуоресценции в 1 клик;
• метод определения концентрации клеток – прямой подсчет;
• источник возбуждения – синий лазер 488 нм;
• каналы детекции:
  • FL1 – 525/50 нм (FITC/Alexa 488);
  • FL2 – 585/40 нм (PE);
  • FL3 – 630/30 нм (PE-Texas Red/ECD/PI);
  • FL4 – 697/60 нм (PerCP /PE-Cy5 / PE-Cy5.5);
  • FL5 – 780/60 нм (PE-Cy7);
• FSC* чувствительность, мкм – менее 1;
• минимальный объем образца, мкл – 90;
• чувствительность, MESF*** – не более 150 (по FITC) и не более 50 (по PE);
• коэффициенты вариации (CV) для всех каналов, % – менее 2;
• размер клеток/частиц, мкм – от 0,5 до 50;
• габариты, Ш × Г × В, см — 500 х 605 х 305;
• вес, кг – 35.

-------------------------------

* FSC (Forward Scatter) – прямое светорассеивание.
** SSC (Side Scatter) – боковое светорассеивание.
***MESF (Molecules of Equivalent Soluble Fluorochrome) – число молекул указанного эквивалентного растворимого флуорохрома.

См. также:

Проточный цитофлуориметр, до 5 лазеров, до 27 флуоресцентных каналов, ZE5, Bio-Rad

Сортер клеток, до 3 лазеров, до 4 флуоресцентных параметров, S3e, Bio-Rad

Антитела

Центрифуги

Диссоциатор клеточный DSC-400, RWD, Китай

Реагент Guava ViaCount позволяет проводить количественный анализ количества и жизнеспособности клеток. Реагент обеспечивает точную и точную оценку широкого спектра клеточных линий, даже тех, которые имеют необычные условия культивирования или склонны к агрегации.

Реагент ViaCount различает жизнеспособные и нежизнеспособные клетки на основе различной проницаемости двух ДНК-связывающих красителей в реагенте Guava ViaCount. Ядерный краситель окрашивает только ядросодержащие клетки, тогда как краситель жизнеспособности ярко окрашивает умирающие клетки. Эта запатентованная комбинация красителей позволяет Guava ViaCount различать жизнеспособные, апоптотические и мертвые клетки. Детали исключены из результатов на основании отрицательного окрашивания ядерным красителем.

Используя всего лишь 20 мкл образца, реагент ViaCount обеспечивает следующее:

• общее абсолютное количество клеток;
• жизнеспособность и проценты;
• проценты и количество апоптоза.

Снят с производства. Замена на AMQAF2000.

Позволяет быстро проводить подсчет клеток, следить за экспрессией флуоресцентных белков и определять жизнеспособность клеток.

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 5–60;
• дипазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴ —1×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл — 10;
• время обработки, сек – 10;
• встроенное ПО;
• камера, МП – 5;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• счет в светлом поле;
• счет по трипановому синему;
• работает с флуоресценцией;
• применение световых кубов EVOS;
• оптическое увеличение, х – 2,5;
• габариты, ШхГхВ, см — 13,9х13,9х22,8;
• вес, кг — 3,829.

Комплект поставки: счетчик клеток, ПО, USB кабель.

Аксессуары и опции: слайд для многократного применения, одноразовый слайд, кубы EVOS.

Видео "Cчетчик клеток и анализатор жизнеспособности клеток Countess II FL Automated Cell Counter":

• Формат образцов:
– 12×75 или 55 мм (пробирки);
– 1,5 или 2 мл (микропробирки);
– d 35 мм (чашки Петри);
– до 20 мл (виалы);
• детектор ― фотонный счетчик;
• диапазон длин волн, нм — 300 – 600;
• чувствительность — 0,5 зептомоль люциферазы светляков, 1 аттомоль АТФ в ячейке;
• динамический диапазон ― 6 декад;
• измерительная камера ― выдвижная, со сменными отражателями и адаптером для образца;
• дозатор (опция) ― до 2-х; объем дозирования — 20 – 5000 мкл с шагом 1 мкл;
• интерфейс 2×USB 2.0, Ethernet;
• управление:
– сенсорный экран (можно работать в перчатках);
– ПК;
• сохранение данных на USB-накопителе в формате CSV (Excel), PDF, HTML;
• ПО;
• габариты, В×Ш×Г, мм — 456×349×150;
• вес (без дозаторов), кг — 5,3.

Области применения:

• анализ репортерных генов;
• быстрое обнаружение заражения клеточных культур микоплазмой (Lonza MycoAlert);
• анализ АТФ;
• пролиферация клеток, цитотоксичность и анализ биомассы;
• анализ апоптоза;
• клеточная люминесценция / реактивные виды кислорода;
• анализ токсичности для окружающей среды и мутагенности.

Аксессуары и опции: дозаторы, протоколы валидации IQ/OQ/PQ, виалы, набор для калибровки (пробирка, зарядное устройство, бокс для хранения).

Это надёжная компактная система мультиплексного анализа исследовательского класса, совместимая с магнитными частицами xMAP (MagPlex).

Области применения:

• изучение иммунного статуса;
• анализ маркеров дисфункции эндокринной системы;
• анализ маркеров острой фазы воспалительных процессов;
• анализ онкомаркеров и онкодиагностика;
• маркеры апоптоза;
• ангиогенез.

Преимущества:

• позволяет одновременно определять до 50 мишеней в одном образце;
• улучшенная производительность и удобство мультиплексного анализа с использованием магнитных частиц;
• настольное и компактное исполнение системы;
• экономия на обслуживании системы и ценных реагентах;
• ПО Bio-Plex Manager 6.1 для анализа данных и оптимизации результатов.

Технические характеристики:

• скорость анализа, мин/планшет – 60;
• 96-луночный формат системы;
• 2 светодиодных лазера с длинами волн 532 и 635 нм;
• габариты, ШxГxВ, см – 16,5 x 60 x 43.

Реагенты и наборы для проведения исследований – по запросу.

• Формат образцов:
– 12×75 или 55 мм (пробирки);
– 1,5 или 2 мл (микропробирки);
– d 35 мм (чашки Петри);
– до 20 мл (виалы);
• детектор ― фотонный счетчик;
• диапазон длин волн, нм — 300 – 600;
• чувствительность — 0,5 зептомоль люциферазы светляков, 1 аттомоль АТФ в ячейке;
• динамический диапазон ― 6 декад;
• измерительная камера ― выдвижная, со сменными отражателями и адаптером для образца;
• дозатор (опция) ― до 2-х; объем дозирования — 20 – 5000 мкл с шагом 1 мкл;
• интерфейс USB или RS-232;
• управление с помощью ПК;
• ПО;
• габариты, В×Ш×Г, мм — 241×349×150;
• вес (без дозаторов), кг — 3,6.

Области применения:

• анализ репортерных генов;
• быстрое обнаружение заражения клеточных культур микоплазмой (Lonza MycoAlert);
• анализ АТФ;
• пролиферация клеток, цитотоксичность и анализ биомассы;
• анализ апоптоза;
• клеточная люминесценция / реактивные виды кислорода;
• анализ токсичности для окружающей среды и мутагенности.

Аксессуары и опции: дозаторы, виалы, калибровочная пробирка, протоколы валидации IQ/OQ/PQ.

Товар временно недоступен. Аналог: C100001, BiOptic.

Система Bioanalyzer 2100 использует микрофлюидную технологию LabChip, обеспечивает высокую точность результатов при минимальных объемах исследуемого образца. В системе используется два принципа анализа: электрофореза и проточной цитометрии.

• Источник света — светодиодный лазер;
• длина волны эмиссии, нм — 635;
• фотоэмиссионный детектор;
• длина волны детекции, нм — 685;
• фильтры эмиссии, нм — 488, 638 нм;
• формат — 16-луночные чипы;
• подключение к ПК — USB 2.0;
• габариты, ШхГхВ, мм — 162 × 412 × 290;
• вес, кг — 10.

Принцип работы: в системе применяют готовые чипы, заполненные агарозным гелем. Движение фрагментов ДНК в капилляре, как и в "классической" методике, происходит под действием тока. Для определения размеров НК, белков используют маркеры, окрашенные интеркалирующими и флуоресцентными красителями.

В случае применения цитометрического модуля: клеточная суспензия, предварительно меченная флюоресцирующими моноклональными антителами или флуоресцентными красителями, попадает в поток жидкости, проходящий через проточную ячейку. Условия подобраны таким образом, что клетки выстраиваются друг за другом за счет т. н. гидродинамического фокусирования струи в струе. В модуле возможно изучение зелёной и красной флуоресценции. Все результаты обрабатываются с помощью ПО 2100 Expert.

Области применения:

• приготовление библиотек при проведении NGS на секвенаторах ДНК HiScan SQ, HiSeq 2000, MiSeq (Illumina); 5500 xl W, 5500w, Ion Torrent IonProton, Ion Torrent PGM (Life Technologies); GS FLX+, GS Junior (Roche);
• подготовка образцов для парноконцевого секвенирования, ChIP-секвенирования;
• выделение белков и НК;
• контроль качества синтезированной in vitro матричной РНК, контроль чистоты выделенной РНК (RIN - RNA Integrity Number);
• определение уровня апоптоза;
• оценка жизнеспособности и пролиферации клеток;
• оценка экспрессии белков в результате связывания с антителами;
• оценка экспрессии белков с помощью зелёного флуоресцентного белка (green fluorescent protein, GFP);
• оценка эффективности трансфекции миРНК (siRNA).

Преимущества:

• система позволяет анализировать ДНК, РНК, белки, клетки с использованием одного прибора;
• чувствительность, пг/мкл — 5 (для ДНК), 50 (для РНК), 1 (для белков);
• максимальная загрузка чипа — до 12 образцов на один чип;
• объем исходного образца, мкл — 1 (для ДНК и РНК), 4 (для белков), 10 мкл (для клеток);
• время анализа, мин — 25-45, в зависимости от используемого чипа.

Комплект поставки: станция подготовки чипов Chip priming station; вортекс IKA; ПО 2100 Expert, набор для электрофореза (приобретается дополнительно), набор для проточной цитометрии (приобретается дополнительно), ПК или ноутбук (приобретается дополнительно).

Характеристики чипов:

Образцы	High Sensitivity DNA	DNA 1000	DNA 7500	DNA 12000
Диапазон размеров, п.н.	50-7000	25-1000	100-7500	100-12000
Диапазон концентраций	5-500 пкг/мкл	0,5-50 нг/мкл	0,5-50 нг/мкл	0,5-50 нг/мкл
Время анализа, мин	45	35	30	30
Число образцов	11	12	12	12

Образцы	Protein 80	Protein 230	High Sensitivity Protein 250
Диапазон размеров, кДа	5-80	14-230	10-250
Диапазон концентраций	60-2000 нг/мкл	15-2000 нг/мкл	0,3-3000 нг/мкл
Время анализа, мин	30	25	30
Число образцов	10	10	10

Образцы	Клетки
Красный канал	возбуждение – 620-645 нм; эмиссия – 674-696 нм.
Синий канал	возбуждение – 458-482 нм; эмиссия – 510-540 нм.
Минимальная клеточная пропускная способность	2,5 клетки / секунды
Минимальная плотность, кл/мл	2,0 x 10⁶
Время анализа, мин	30
Количество образцов	6
Объём образца, мкл	10 (клеток 2 x 10⁴ в мл)