ДНК-лигаза Т4 катализирует образование фосфодиэфирной связи между 5’-фосфорилированным и 3’-гидроксилированным концами двух фрагментов двойной цепи ДНК или РНК. Фермент восстанавливает однонитевые разрывы в двойных цепях ДНК, РНК или гибридов ДНК/РНК. ДНК-лигаза сшивает как липкие, так и тупые концы, но не однонитевые нуклеиновые кислоты.
В качестве кофермента требуется наличие АТФ.
ДНК-лигаза Т4 от Thermo Scientific активна в рестриктазных буферах, лигазном буфере и буфере для обратной транскрипции.
Реакция лигирования липких концов происходит в течение 10 минут при комнатной температуре.
Для лигирования тупых концов в комплект входит раствор полиэтиленгликоля.
Области применения:
- Клонирование фрагментов ДНК или ПЦР-фрагментов в вектор после рестрикции;
-
пришивка олигонуклеотидных линкеров и адапторов к ДНК;
- лигазная детекция РНК ;
-
репарация 1-цепочечных разрывов в двухцепочечных молекулах нуклеиновых кислот;
-
циркуляризация линейной ДНК.
ДНК-лигаза Т4 Thermo Scientific комплекутется 10-кратным лигазным буфером и 50% растворов ПЭГ.
Активность ДНК-лигазы может измеряться в единицах лигирования липких концов (лигирование 50% HindIII-фрагментов ДНК фага в течение 30 минут) или в единицах Вейсса (каталитическое превращение 1 нмоль дифосфата в течение 20 минут). 1 единица Вейса равна 200 единицам лигирования липких концов.
Важно!
1) Связывание лигазы с ДНК може приводить к смещению полос в агарозном геле. Во избежание подобного смещения рекомендуется добавлять к электрофорезным образцам буфер для нанесения с SDS и инкубировать образцы в течение 10 минут при +65оС, а затем охладить во льду.
2) При электротрансформации лигазной смеси необходимо произвести очистку ДНК от фермента (на спин-колонках или фенол-хлороформной экстракцией)
Условия хранения: -20оС
